Sebuah teknik untuk penentuan urutan base polynucleotide homogen yang bertindak sebagai template dalam sistem replikasi. A kecil jumlah trifosfat spesifik dideoxynucleoside disertakan dengan triphosphates normal deoxynucleotide empat selama replikasi. Penghentian jaringan terjadi setiap kali dideoxynucleotide dimasukkan yang menghasilkan polynucleotide berlabel yang panjang rantai, dievaluasi oleh polyacrylamide-Elektroforesis, indikasi dari jarak dari 5'-akhir primer ke posisi di mana nukleotida normal terjadi. Deteksi Elektroforesis band mungkin oleh label seperti ³² P atau, lebih baru-baru ini oleh fluorophore yang dimasukkan ke dalam primer (pewarna primer Sekuensing) atau dideoxynucleotide (pewarna terminator Sekuensing). Sebenarnya, variasi pewarna metode terminator, pelabelan dari masing-masing dari empat dideoxynucleotides dengan fluorophore yang memancarkan pada panjang gelombang yang berbeda memungkinkan identifikasi dasar yang berakhir Elektroforesis setiap band dalam campuran terpisah dari semua empat (Singel Sekuensing lane).